Análisis de Endotoxinas bacterianas

Las endotoxinas bacterianas representan un riesgo significativo para los pacientes; las mismas son los pirógenos más frecuentes encontrados en los dispositivos médicos y en los productos farmacéuticos.

Son sustancias que se encuentran fácilmente formando parte de la membrana exterior de las bacterias Gram negativas.

Importancia de las pruebas de endotoxina bacteriana

En primer lugar, el ensayo de Endotoxinas bacterianas, también conocido como LAL test (Lisado de Amebocitos de Limulus) es útil para poder detectar, y cuantificar las endotoxinas Gram (-) dentro de la pared celular a partir de un lisado de amebocitos del cangrejo herradura.

Este tipo de análisis es requerido en la industria manufacturera debido a que corresponde a uno de los últimos eslabones en el proceso de fabricación y ensamblaje de los dispositivos médicos. Además que, “Si no se detectan, altos niveles de endotoxinas pueden ingresar al torrente sanguíneo a través de un dispositivo médico y causar reacciones adversas como: shock hemorrágico, diarrea, meningitis, fiebre, resistencia alterada a infecciones bacterianas, una caída rápida de la presión arterial y muchas otras enfermedades graves”. (Eurofins, 2022).

Por ende, el LAL test se realiza como una prueba o análisis de liberación de lotes, la misma evalúa el dispositivo médico de prueba que tiene contacto con el sistema cardiovascular o con el líquido cefalorraquídeo de las personas. Siendo así que, “Cualquier producto que entre en contacto directo o indirecto con los sistemas intravascular, intralinfático, intratecal y/o intraocular debe someterse a una prueba de endotoxinas bacterianas (LAL)” esto debido a realizar una confirmación de que el contenido de endotoxinas del producto se encuentra por debajo del límite de liberación permitido.

Tipos de LAL test

• Método Gel-Clot: también conocido como gelificación. Este método lo que busca es cuantificar la cantidad de gel que se forma a partir de la reacción con el lisado de amebocitos una vez este reactivo entre en contacto con cierta presencia de endotoxinas. Este tipo de método es tanto cuantitativo como cualitativo, ya que además de que es posible determinar la cantidad exacta de endotoxinas presentes, es posible observar a simple vista como al estar en contacto con dicha bacteria, “la solución se coagulará y el gel permanecerá en el fondo del tubo”. (Eurofins, 2022).
• Método Cromogénico: para el desarrollo de este, resulta necesario adicionar el reactivo de color que permite cuantificar la cantidad de endotoxinas presentes en la muestra; comúnmente se utiliza el reactivo p-nitroanilina, el cual es incoloro hasta entrar en contacto con dicha bacteria; es decir, “Más endotoxina significa que la solución se volverá amarilla más rápido.” (Eurofins, 2022).
• Método Turbidimétrico: a través de espectrofotometría es posible detectar la presencia o no de turbidez en la muestra; por lo que, es posible identificar un cambio en la claridad de la muestra siempre que se esté en presencia de endotoxinas bacterianas. Entre mayor sea el cambio en la solución, y mejor se aprecia la turbidez en la misma, mayor es la cantidad de endotoxinas presentes en la muestra de prueba.

Importante especificar que, independientemente del método que se elija para realizar el análisis, el contenido máximo de endotoxinas presentes en un dispositivo médico es de 0,5 UE/mL.

Oferta de análisis

Como representantes de Eurofins en América Latina, contamos con la capacidad analítica de ofrecer los diferentes métodos de última generación para la determinación y cuantificación de las endotoxinas bacterianas presentes en sus productos y dispositivos médicos.
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Referencias

Burguet, N & Brito, L. (2012). Validación del método LAL para determinar endotoxinas bacterianas en el inyectable heparina sódica VacciMonitor, 21(3), pp. 32-36. Recuperado de http://scielo.sld.cu/pdf/vac/v21n3/vac06312.pdf 
Carrillo C, Ospina J, Aldana D, Arias J, Escheverri C. (2006). Validación de endotoxinas bacterianas en Ranitidina y Penicilina G sódica inyectables mediante la prueba de Lisado del amebocito de Limulus. Rev Universitas Scientiatum;11(1), pp.15-28.
Eurofins Medical Device Testing. (2022). Bacterial Endotoxin Testing/LAL. Eurofins. Recuperado de https://www.eurofins.com/medical-device/services/microbiology-sterility/bacterial-endotoxin-lal/ 
Perdomo R. (2004). Ensayo del lisado de amebocitos del Limulus (LAL). Revista Cubana de Farmacia; 38(1), pp. 8-15.
Solís Asencios, J. (2004). Validación de la prueba de endotoxinas bacterianas LAL (Limus amebocyte lysate) por el Método de Gel Clot en clindamicina 600mg inyectable. [Tesis de Licenciatura]. Universidad Nacional Mayor de San Marcos.